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答案

PCR反應(yīng)進(jìn)行的條件：引物(PCR引物為DNA片段,，細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的引物為一段RNA鏈）、酶、dNTP,、模板和緩沖液（其中需要Mg2+）,。

解析

引物有多種設(shè)計(jì)方法，由PCR在實(shí)驗(yàn)中的目的決定,，但基本原則相同,。PCR所用的酶主要有兩種來(lái)源：Taq和Pfu，分別來(lái)自兩種不同的噬熱菌,。其中Taq擴(kuò)增效率高但易發(fā)生錯(cuò)配,。Pfu擴(kuò)增效率弱但有糾錯(cuò)功能。所以實(shí)際使用時(shí)根據(jù)需要必須做不同的選擇,。

知識(shí)點(diǎn)

PCR的特點(diǎn)：

1,、靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12）量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克（μg=-6）水平,。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞,；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位）,；在細(xì)菌學(xué)中最小檢出率為3個(gè)細(xì)菌,。

2,、簡(jiǎn)便,、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后,，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,，不一定要用同位素,，無(wú)放射性污染、易推廣,。

3,、純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及RNA均可作為擴(kuò)增模板,?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液,、洗嗽液,、毛發(fā)、細(xì)胞,、活組織等DNA擴(kuò)增檢測(cè),。