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姓名：劉丹丹,；唐彤彤,；陳炎
工作單位：江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司
完成時(shí)間：2019年05月
甲磺酸帕珠沙星用法用量
劉丹丹;唐彤彤；陳炎,；周換換,；霍艷萍；高曉艷
（江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司,，江蘇 連云港 222047）
摘要：目的：建立一種快速靈敏檢測(cè)注射用甲磺酸帕珠沙星含量的HPLC方法,。方法：采用C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）,，流動(dòng)相為乙腈-磷酸三乙胺溶液（0.5%磷酸,，1%三乙胺）=（15:85）；流速1.0ml/min,，檢測(cè)波長為248nm,，柱溫30℃。結(jié)果：帕珠沙星在10.1992μg/ml～101.992μg/ml范圍內(nèi),，呈良好的線性關(guān)系（r=0.9999）,回收率為99.5%,RSD為0.3%,。結(jié)論：HPLC可以迅速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出注射用甲磺酸帕珠沙星的含量,。該方法的穩(wěn)定性,、重復(fù)性良好,，可作為注射用甲磺酸帕珠沙星質(zhì)量分析控制方法。
關(guān)鍵詞：帕珠沙星 含量測(cè)定 高效液相色譜法
Determination of Pazufloxacin Mesylate for Injection by high-performance liquid chromatography
Liu Dan-dan,Tang Tong-tong,chen yan,Zhou Huan-huan,HuoYan-ping,Gao Xiao-yan
（Jiangsu Kanion Pharmaceutical Limited by Share Ltd, Lianyungang 222047, Jiangsu China）
Abstract：Objective To establish a rapid and sensitive high-performance liquid chromatography(HPLC) method for detecting Pazufloxacin Mesylate for Injection . Methods: The analysis was carried out on C18 column (250mm x 4.6mm, 5μm).The mobile phase for pazufloxacin was a mixture of acetonitrile and 0.5% phosphoric acid containing 1% trethylamine （15：85),ang 5ul of theresulting solution was injected into the HPLC system at a flow rate 1.0 ml/ min . The detection wavelength was set at 248 nm and the column temperature was set at 30 ℃. Results:The liner range of pazufloxacin mesilate was 10.1992 μg/ml～101.992μg/ml, Show a good linear relationship (r = 0.9999).The average recovery (n=9）was 99.5%, RSD was 0.3% . Conclusion: HPLC is both sensitive and selective for Pazufloxacin Mesylate for Injection. The stability of the method, good repeatability,，and can be used for Pazufloxacin Mesylate for Injection quality control are analyzed.
Key words ：Pazufloxacin,；Determination ；HPLC
注射用甲磺酸帕珠沙星的主要成分是甲磺酸帕珠沙星,，為帕珠沙星的甲磺酸鹽,。甲磺酸帕珠沙星是新一代的喹諾酮類抗菌藥物，由日本化學(xué)公司和綠十字公司聯(lián)合開發(fā),于2002年04月在日本獲準(zhǔn)上市,是一種廣譜抗菌劑,，作用靶位是細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶II和IV ,通過抑制細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ和Ⅳ的活性,從而抑制細(xì)菌DNA的合成,而導(dǎo)致細(xì)菌的死亡[1],。作為新一代的喹諾酮類抗菌藥物甲磺酸帕珠沙星比原來的喹諾酮類抗菌藥物具有更強(qiáng)的抗菌活性、更廣泛的抗菌譜和更好的耐受性,，而且其光毒性明顯降低[2],。本品適用于敏感細(xì)菌引起的慢性呼吸道疾病繼發(fā)感染、腎盂腎炎,、復(fù)雜性膀胱炎,、前列腺炎、燒傷創(chuàng)面感染,、外科傷口感染,、膽囊炎、膽管炎,、腹腔內(nèi)膿腫,、腹膜炎、生殖器官感染等疾病,。臨床上主要用于革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌引起的呼吸道,、泌尿道和皮膚組織感染，特別是對(duì)復(fù)雜性感染,、急性感染,、重度感染、手術(shù)及外傷感染和對(duì)一般抗感染藥有耐藥性的細(xì)菌有較好的療效,，而對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的副作用較小[3],。目前注射用甲磺酸帕珠沙星含量測(cè)定的方法是紫外—可見分光光度法，而高效液相色譜法具有高壓,、高速,、高效、高靈敏度,、應(yīng)用范圍廣,、重復(fù)性、精密度,、靈敏度更高等特點(diǎn),，為制劑含量測(cè)定的首選方法,。為了更好的控制注射用甲磺酸帕珠沙星的質(zhì)量，建立了該藥的HPLC含量測(cè)定方法,。
1 儀器與試藥
1.1 儀器 Agilent 1200 高效液相色譜儀（檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器）,，G1314A VWD紫外檢測(cè)器，所用軟件為ChemStation色譜工作站,。Milli-Q Advantage A10 超純水機(jī),，Satorius ME5電子分析天平，JKQ-250DC型數(shù)控超聲清洗器,。
1.2 試藥 注射用甲磺酸帕珠沙星（江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司,，規(guī)格0.5g，批號(hào)170101,、170102,、180101、180102,、180501,、180502、190201,、190202、190203,、190204）,；帕珠沙星對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)130460-201302,，以C16H15FN2O4計(jì),，含量為76.6%）；乙腈為色譜純（美國Tedia AS-1122）,；磷酸為分析純（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）,；三乙胺為分析純（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；水為超純水,。
2 方法學(xué)考察【4】與結(jié)果
2.1 色譜條件
色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（250×4.6mm,5μm）,；流動(dòng)相：乙腈-磷酸三乙胺溶液（0.5%磷酸，1%三乙胺）=15:85【5】,；流速：1.0ml/min,；檢測(cè)波長：248nm；柱溫：30℃,；進(jìn)樣量：5μl,。
2.2 對(duì)照品溶液的制備
精密稱取帕珠沙星對(duì)照品適量（約相當(dāng)于帕珠沙星10mg），置50ml容量瓶中,，加水適量使溶解并稀釋至刻度,，搖勻,，再精密吸取5ml至20ml量瓶中，用水稀釋制成每1ml中約含帕珠沙星50ug的溶液,，作為對(duì)照品溶液,。
2.3 供試品溶液的制備
取本品10瓶，傾出內(nèi)容物,，將內(nèi)容物研細(xì)并混合均勻,，精密稱取對(duì)照品（約相當(dāng)于帕珠沙星50mg），置100ml容量瓶中,，加水適量使溶解并稀釋至刻度,，搖勻，再精密吸取5ml至50ml量瓶中,，用水稀釋制成每1ml中約含帕珠沙星50ug的溶液,，作為供試品溶液。
2.4 專屬性考察
陰性對(duì)照溶液的制備：按照處方配比取輔料適量,，按2.3供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液,。取對(duì)照品溶液，陰性對(duì)照溶液,、供試品溶液各5μl,，注入高效液相色譜儀，測(cè)定,。
結(jié)果表明輔料不干擾主藥的含量測(cè)定,，見圖1。
陰性對(duì)照溶液液
對(duì)照品溶液
供試品溶液
圖1 陰性對(duì)照溶液,、對(duì)照品溶液,、供試品溶液
2.5 線性關(guān)系試驗(yàn)
精密稱取帕珠沙星對(duì)照品適量，按照2.2對(duì)照品溶液制備制得濃度為101.992μg/ml作為儲(chǔ)備液,，將儲(chǔ)備液分別稀釋成制成濃度為10.1992μg/ml,、30.5976μg/ml、50.996μg/ml,、81.5936μg/ml,、101.992μg/ml的溶液，進(jìn)樣5μl,，以進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）,，峰面積為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得帕珠沙星回歸方程為Y=26.037X-4.7398,r=0.9999,。
結(jié)果表明帕珠沙星在10.1992μg/ml～101.992μg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系,，見圖2。
圖2 帕珠沙星標(biāo)準(zhǔn)曲線
2.6 精密度試驗(yàn)
取帕珠沙星對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次,，計(jì)算峰面積RSD值為0.3%,，結(jié)果表明精密度良好,，見表1。
表1 精密度結(jié)果
序號(hào)
峰面積
平均值
RSD（%）
1
1386.0
1385.4
0.3
2
1388.1
3
1390.4
4
1383.9
5
1377.3
6
1387.0
2.7 重復(fù)性試驗(yàn)
取樣品,，按2.3制備供試品溶液方法制備,，平行制備6份，測(cè)定,，結(jié)果帕珠沙星的平均含量為99.1%,，RSD=0.4%，試驗(yàn)結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好,，見表2,。
表2 重復(fù)性結(jié)果
序號(hào)
含量（%）
平均值（%）
RSD（%）
1
99.2
99.1
0.4
2
98.5
3
99.1
4
99.4
5
98.7
6
99.5
2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)
取供試品溶液，室溫放置,，按上述方法分別在第0,、2、4,、8,、12、24小時(shí)進(jìn)行測(cè)定,，結(jié)果帕珠沙星平均含量為98.9%,，RSD值為0.5%，表明該溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定良好,，見表3,。
表3 穩(wěn)定性結(jié)果
時(shí)間（h）
含量（%）
平均值（%）
RSD（%）
1
99.6
98.9
0.5
2
98.8
4
99.2
8
98.5
12
99.0
24
98.4
2.9 回收率試驗(yàn)
取已知含量的樣品（帕珠沙星含量: 99.1%）九份，每份取約0.6g,，分別按80%、100%和120%加入對(duì)照品,，按2.3制備供試品溶液,，分別精密吸取5μL，注入液相色譜儀,，測(cè)定,，計(jì)算加樣回收率，見表4,。
表4 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）
序號(hào)
樣品含量mg
加標(biāo)量mg
測(cè)得量mg
回收率（%）
平均回收率（%）
RSD(%)
1
11.925
9.556
21.546
99.23
99.5
0.3
2
11.917
9.584
21.519
99.25
3
11.921
9.578
21.585
99.26
4
12.064
11.453
23.279
99.79
5
12.007
11.500
23.303
99.77
6
12.078
11.532
23.352
99.78
7
11.850
14.012
25.921
99.79
8
11.830
13.881
25.768
99.77
9
11.845
14.358
26.211
99.78
2.10 樣品測(cè)定
取10批樣品,，按2.3制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液,、對(duì)照品溶液各5μl,，注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算結(jié)果,；與原方法紫外分光光度法的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較,，結(jié)果基本一致,，表明該方法具有較高的準(zhǔn)確度，見表5,。
表5 樣品測(cè)定結(jié)果
批號(hào)
HPLC含量（%）
UV含量（%）
RSD（%）
170201
99.4
99.7
0.21
170202
98.2
98.5
0.22
180201
103.6
103.2
0.27
180202
100.0
99.4
0.43
180101
102.4
102.8
0.27
180102
98.3
98.0
0.22
190201
99.1
98.6
0.36
190202
101.2
101.5
0.21
190203
98.4
98.0
0.29
190204
97.1
96.8
0.22
3 討論
3.1 測(cè)定波長的選擇
甲磺酸帕珠沙星對(duì)照品溶液在200～400nm之間進(jìn)行紫外光譜掃描[6],，結(jié)果顯示帕珠沙星在248nm處有最大吸收峰，考因此,，選擇248nm波長作為檢測(cè)波長,，見圖2。
圖2 紫外光譜圖
3.2 流動(dòng)相的選擇通過查閱相關(guān)資料[4-10],，確定了三種流動(dòng)相進(jìn)行測(cè)定,，這三種流動(dòng)相分別是0.1%磷酸溶液-乙腈（85:15）、1%醋酸溶液-乙腈（85:15）以及磷酸三乙胺溶液（0.5%磷酸,，1%三乙胺）-乙腈（85:15）,。測(cè)定的結(jié)果顯示流動(dòng)相為0.1%磷酸溶液-乙腈（85:15）的帕珠沙星出峰時(shí)間為2.848min，出峰時(shí)間太早,，會(huì)有溶劑峰干擾,；流動(dòng)相為1%醋酸溶液-乙腈（85:15）的帕珠沙星出峰時(shí)間為3.636min，出峰時(shí)間同樣太早,，也會(huì)有溶劑峰干擾,；流動(dòng)相為（磷酸三乙胺溶液（0.5%磷酸，1%三乙胺）-乙腈（85:15）的帕珠沙星出峰時(shí)間為9.902min,，出峰時(shí)間合適,，對(duì)稱因子為1.01。所以最終確定磷酸三乙胺溶液（0.5%磷酸,，1%三乙胺）-乙腈（85:15）為流動(dòng)相,。3.3 色譜柱和柱溫的選擇3.3.1在色譜柱的選擇中，我們選擇不同廠家型號(hào)的色譜柱進(jìn)行測(cè)定,，結(jié)果見表6,。由表6得出不同廠家不同品牌的色譜柱適用性均良好，色譜柱最終確定為C18柱,。表6 色譜柱對(duì)比結(jié)果
序號(hào)
色譜柱品牌
色譜柱參數(shù)
理論塔板數(shù)
拖尾因子
1
Kromasil
C18,，250mm×4.6mm，5μm
11389
1.00
2
Thermo
HYPERSIL C18,，250mm×4.6mm,，3μm
13403
1.01
3
Agilent
ZORBAXEclipseXDB C18,
250mm×4.6mm，5μm
15686
1.00
4
Phenomenon
Luna C18, 250mm×4.6mm, 5 μm
13890
1.01
3.3.2在柱溫的選擇中,，我們選擇了20℃,、30℃、40℃這三個(gè)溫度點(diǎn)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表7,。30.0℃和40.0℃的柱效都良好,，但是考慮到溫度越高對(duì)樣品穩(wěn)定性有影響，綜合考慮選擇柱溫30.0℃,。表7 柱溫對(duì)比結(jié)果
序號(hào)
柱溫（℃）
理論塔板數(shù)
對(duì)稱因子
1
20.0
10426
1.10
2
30.0
12374
1.01
3
40.0
12745
1.01
3.4 建立了高效液相色譜法測(cè)定注射用甲磺酸帕珠沙星含量的新方法,，該方法具有簡單、快速,、靈敏度高,，線性范圍良好等特點(diǎn)。采用此方法測(cè)定了10批注射用注射用甲磺酸帕珠沙星的含量并與原標(biāo)準(zhǔn)方法紫外分光光度法的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較,，其測(cè)定結(jié)果基本一致,，表明該方法具有較高的準(zhǔn)確度。參考文獻(xiàn)
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