總結(jié)是寫給人看的，條理不清，人們就看不下去，即使看了也不知其所以然,，這樣就達(dá)不到總結(jié)的目的,。怎樣寫總結(jié)才更能起到其作用呢,？總結(jié)應(yīng)該怎么寫呢,？以下是小編精心整理的總結(jié)范文,，供大家參考借鑒,，希望可以幫助到有需要的朋友,。

生物細(xì)胞凋亡總結(jié)分析 生物細(xì)胞衰老與凋亡篇一

1．細(xì)胞凋亡的意義 細(xì)胞凋亡普遍存在于生物界,，既發(fā)生于生理狀態(tài)下，也發(fā)生于病理狀態(tài)下,。由于細(xì)胞凋亡對胚胎發(fā)育及形態(tài)發(fā)生（morphogenesis）,、組織內(nèi)正常細(xì)胞群的穩(wěn)定、機(jī)體的防御和免疫反應(yīng),、疾病或中毒時引起的細(xì)胞損傷,、老化、腫瘤的發(fā)生進(jìn)展起著重要作用,，并具有潛在的治療意義,，至今仍是生物醫(yī)學(xué)研究的熱點。細(xì)胞凋亡過多可引起疾病發(fā)生,，如：①愛滋病的發(fā)展過程中,，cd4+t細(xì)胞數(shù)目的減少；②移植排斥反應(yīng)中,，細(xì)胞毒性t細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞死亡,；③缺血及再灌注損傷，導(dǎo)致心肌細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞的凋亡增多,；④神經(jīng)系統(tǒng)退化性疾?。╝lzheimer病、parkinson's?。┑闹匾蚴羌?xì)胞凋亡的異常增加。神經(jīng)細(xì)胞的凋亡參與老化及alzheimer病的發(fā)生,。alzheimer氏病是一種常見的老年病,，患者在臨床上表現(xiàn)為進(jìn)行性的智力減退。⑤暴露于電離輻射可引起多種組織細(xì)胞的凋亡,。細(xì)胞凋亡過少也可引起疾病發(fā)生：在腫瘤的發(fā)生過程中,，誘導(dǎo)凋亡的基因如p53等失活、突變,，而抑制凋亡的基因如bcl-2等過度表達(dá),，都會引起細(xì)胞凋亡顯著減少，在腫瘤發(fā)病學(xué)中具有重要意義,；針對自身抗原的淋巴細(xì)胞的凋亡障礙可導(dǎo)致自身免疫性疾?。荒承┎《灸芤种破涓腥炯?xì)胞的凋亡而使病毒存活,。

2．細(xì)胞凋亡的形態(tài)變化 電鏡下細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化是多階段的,，可分為 ①細(xì)胞漿濃縮，核糖體,、線粒體等聚集,，細(xì)胞體積縮小,，結(jié)構(gòu)更加緊密； ②染色質(zhì)逐漸凝聚成新月狀附于核膜周邊,，嗜堿性增強(qiáng),。細(xì)胞核固縮呈均一的致密物，進(jìn)而斷裂為大小不一的片段：

③胞膜不斷出芽,、脫落,，細(xì)胞變成數(shù)個大小不等的由胞膜包裹的凋亡小體(apoptotic bodies)。凋亡小體內(nèi)可含細(xì)胞漿,、細(xì)胞器和核碎片,，有的不含核碎片；④凋亡小體被具有吞噬功能的細(xì)胞如巨噬細(xì)胞,、上皮細(xì)胞等吞噬,、降解： ⑤凋亡發(fā)生過程中，細(xì)胞膜保持完整,，細(xì)胞內(nèi)容物不釋放出來,，所以不引起炎癥反應(yīng)。左圖 典型凋亡小體：染色質(zhì)呈新月狀,，并可見細(xì)胞器 右圖 凋亡細(xì)胞：凋亡細(xì)胞(↑)與鄰近細(xì)胞分離 細(xì)胞凋亡 光鏡下凋亡一般累及單個或少數(shù)幾個細(xì)胞,，凋亡細(xì)胞呈圓形，胞漿紅染,，細(xì)胞核染色質(zhì)聚集成團(tuán)塊狀,。由于凋亡細(xì)胞迅速被吞噬，又無炎癥反應(yīng),，因此,，在常規(guī)切片檢查時，一般不易發(fā)現(xiàn),，但在某些組織如反應(yīng)性增生的次級淋巴濾泡生發(fā)中心則易見到,。病毒性肝炎時，嗜酸性小體形成即是細(xì)胞凋亡,。

3．細(xì)胞凋亡的機(jī)制 細(xì)胞凋亡是一系列依賴能量的分子水平變化的終點,，細(xì)胞凋亡過程包括以下4個階段，即：誘導(dǎo)啟動,、細(xì)胞內(nèi)調(diào)控,、實施和凋亡細(xì)胞的吞噬搬運階段。

（1）誘導(dǎo)啟動 引起凋亡的信號可以來自細(xì)胞外,，通過跨膜傳導(dǎo)對細(xì)胞內(nèi)的調(diào)控分子起作用,；也可以直接作用于細(xì)胞內(nèi)的靶分子。一些跨膜作用的抑制因子(如生長因子,、某些激素,、細(xì)胞因子,、某些病毒蛋白等)具有抑制凋亡的作用，有利于細(xì)胞的生存,。當(dāng)這些因子缺乏時,，會激發(fā)細(xì)胞凋亡。另外一些跨膜作用的刺激因子通過受體與配體的結(jié)合而激活細(xì)胞凋亡程序,，其中最重要的是腫瘤壞死因子受體家族,。此外，尚有多種其它凋亡誘導(dǎo)因子,。在胚胎發(fā)育過程中,，形態(tài)發(fā)生蛋白、生長因子,、分化因子對細(xì)胞凋亡可起促進(jìn)作用,，又可起抑制作用。

（2）細(xì)胞內(nèi)調(diào)控 細(xì)胞內(nèi)的某些特異蛋白與細(xì)胞死亡信號相連接,，這些特異蛋白對細(xì)胞的死亡與否起決定作用,。bcl-2蛋白家族(bcl-2 family of proteins)是調(diào)節(jié)線粒體通透性的主要成分，通過形成同源(bcl-2/bcl-2, bax/bax)和異源(bcl-2/bax)二聚體對細(xì)胞凋亡進(jìn)行調(diào)控,。bcl-2同源二聚體抑制細(xì)胞凋亡,，bax同源二聚體促進(jìn)細(xì)胞凋亡。此外,，細(xì)胞表面受體fas(cd95),，屬tnfr家族，當(dāng)免疫細(xì)胞產(chǎn)生的fas的配體與t細(xì)胞表面的fas結(jié)合時,，也啟動了死亡程序,。這種fas-fas配體介導(dǎo)的凋亡在清除免疫反應(yīng)(如自身免疫病)中被激活的淋巴細(xì)胞非常重要。細(xì)胞凋亡后的梯狀dna 足葉乙甙誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡后的梯狀dna

（3）凋亡的實施 細(xì)胞凋亡的實施是通過蛋白水解的一系列連鎖反應(yīng)實現(xiàn)的,。各種組織的細(xì)胞凋亡都要激活caspase家族。caspase成員作為酶原的形式存在于細(xì)胞內(nèi),，經(jīng)裂解激活后,，迅速啟動序列性酶解死亡程序，裂解細(xì)胞骨架和細(xì)胞核蛋白基質(zhì)并激活了核酸內(nèi)切酶,。在內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶作用下,，dna進(jìn)行有控降解，產(chǎn)生長度為180～200 bp整倍數(shù)的dna片段,，這正好是纏繞組蛋白多聚體的長度,，提示染色質(zhì)dna恰好是在核小體與核小體連接部被切斷。dna瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)ladder也成為檢測凋亡發(fā)生的重要標(biāo)志,。

（4）凋亡細(xì)胞的吞噬搬運 凋亡細(xì)胞碎片的表面有標(biāo)志分子(血小板反應(yīng)素,、粘附糖蛋白)有利于臨近的巨噬細(xì)胞以及其他細(xì)胞的識別,、吞噬和處理。凋亡細(xì)胞的吞噬搬運過程非常有效而迅速,，凋亡細(xì)胞很快消失,，不留痕跡，也無炎癥反應(yīng),。

4．細(xì)胞凋亡與壞死的區(qū)別 凋亡 壞死

1機(jī)制 基因調(diào)控的程序化（programmed）細(xì)胞死亡,，主動進(jìn)行（自殺性）意外事故性（accident）細(xì)胞死亡，被動進(jìn)行（他殺性）

2誘因 生理性或輕微病理性刺激因子誘導(dǎo)發(fā)生,，如生長因子缺乏 病理性刺激因子誘導(dǎo)發(fā)生,，如缺氧、感染,、中毒 死亡范圍 多為散在的單個細(xì)胞 多為聚集的大片細(xì)胞

3形態(tài)特征 細(xì)胞固縮,，核染色質(zhì)邊集，細(xì)胞膜及各細(xì)胞器膜完整,，膜可發(fā)泡成芽,，形成凋亡小體 細(xì)胞腫脹，核染色質(zhì)絮狀或邊集,，細(xì)胞膜及各細(xì)胞器膜溶解破壞,，溶酶體酶釋放，細(xì)胞自溶

4生化特征 耗能的主動過程,，有新蛋白合成,，dna早期規(guī)律降解為180-200bp片段，瓊脂凝膠電泳呈特征性梯帶狀 不耗能的被動過程,，無新蛋白合成,，dna降解不規(guī)律，片段大小不一,，瓊脂凝膠電泳不呈梯帶狀

5周圍反應(yīng) 不引起周圍組織炎癥反應(yīng)和修復(fù)再生,，但凋亡小體可被鄰近細(xì)胞吞噬 引起周圍組織炎癥反應(yīng)和修復(fù)再生

細(xì)胞自噬

細(xì)胞自噬的生理功能

1及時清除細(xì)胞中隨時產(chǎn)生的“垃圾”（如破損或衰老的細(xì)胞器、長壽命蛋白質(zhì),、合成錯誤或折疊錯誤的蛋白質(zhì)等）,，2維持細(xì)胞自穩(wěn)狀態(tài).無論是腫瘤細(xì)胞還是正常細(xì)胞，保持一種基礎(chǔ),、低水平的自噬活性是至關(guān)重要的

3.同時,，自噬的產(chǎn)物，如氨基酸,、脂肪酸等小分子物質(zhì),，又可為細(xì)胞提供一定的能量和合成底物.可以說，細(xì)胞自噬就是一個“備用倉庫”.鑒于上述作用,，在正常生理情況下,，細(xì)胞自噬可以幫助細(xì)胞在缺乏營養(yǎng)的惡劣環(huán)境中生存.自噬也可為腫瘤細(xì)胞帶來幾大好處：

（1）首先,，腫瘤細(xì)胞本身就具有高代謝的特點，對營養(yǎng)和能量的需求比正常細(xì)胞更高,，但腫瘤微環(huán)境往往不能如意,，如腫瘤發(fā)生初始期到血管發(fā)生之前、腫瘤長大發(fā)生血管崩塌時,、腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)灶游走時等都會出現(xiàn)營養(yǎng)不足或供應(yīng)中斷,，而此時提高自噬活性可以有助于度過這一危機(jī)

（2）（2）當(dāng)化療、放療后,，腫瘤細(xì)胞會產(chǎn)生大量的破損細(xì)胞器,、損壞的蛋白質(zhì)等有害成分，此時提高自噬活性可及時清除這些有害物質(zhì),，并提供應(yīng)急的底物和能量為修復(fù)受損dna贏得時間和條件.(3)另外,，抑制細(xì)胞自噬可以導(dǎo)致細(xì)胞更容易發(fā)生凋亡，然而,，細(xì)胞自噬在腫瘤的生成和癌癥的發(fā)展中到底扮演怎樣的角色,，目前還沒有取得廣泛一致的意見.細(xì)胞自噬可以抑制細(xì)胞發(fā)生癌變，可能產(chǎn)生于以下幾種機(jī)制

(1)細(xì)胞自噬的抑制會加重壞死細(xì)胞的局部炎癥反應(yīng),，從而導(dǎo)致腫瘤的生長(2)而細(xì)胞自噬可以清除壞死的細(xì)胞器,，調(diào)整內(nèi)源性的壓力，從而穩(wěn)定基因組,減少細(xì)胞向癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)變.(3)細(xì)胞自噬既可以加強(qiáng)細(xì)胞檢驗點的檢查作用,，又起到了穩(wěn)定基因組的作用,，從而減少了細(xì)胞的癌變

生物細(xì)胞凋亡總結(jié)分析 生物細(xì)胞衰老與凋亡篇二

細(xì)胞凋亡實驗技術(shù)總結(jié) 一形態(tài)學(xué)檢測

1、光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡觀察法

未染色細(xì)胞:凋亡細(xì)胞體積變小,、變形,，膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，晚期出現(xiàn)凋亡小體,。貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮,，變圓，脫落,。染色細(xì)胞:姬姆薩染色,，瑞氏染色等。凋亡細(xì)胞染色質(zhì)濃縮,，邊緣化，核膜裂解,，染色質(zhì)分割成塊狀,，形成凋亡小體。

2,、熒光顯微鏡檢測法-熒光染料

例如,，碘化丙啶(pi)是一種核酸染料,，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞,，pi 能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核紅染,。選用536nm 激發(fā)光，細(xì)胞核呈紅色熒光,。

3,、電子顯微鏡

收集細(xì)胞，2.5%戊二醛4°c 固定24h,，1%四氧化鋨后固定,，丙酮梯度脫水，經(jīng)包埋劑浸透后環(huán)氧樹脂包埋,，超薄切片,，醋酸鈾和枸櫞酸鉛雙重染色，透射電鏡觀察,。凋亡ⅰ期的細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤繞,，出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象的空泡結(jié)構(gòu)。ⅱa 期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚,、邊緣化;細(xì)胞凋亡的晚期,，細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體,。

4,、激光掃描共焦顯微鏡技術(shù)

fitc-annexinv+pi雙染，觀察凋亡過程中細(xì)胞膜ps表面的變化,，并區(qū)分正常細(xì)胞(an-pi-),，早期凋亡細(xì)胞(an+pi-)，晚期凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞(an+pi+),，細(xì)胞收集過程中出現(xiàn)的損傷細(xì)胞(an-pi+),。

二、細(xì)胞凋亡的生化及分子生物學(xué)檢測

1,、dna 斷裂檢測法

如使用瓊脂糖凝膠電泳檢測,，細(xì)胞凋亡時，核染色質(zhì)凝聚,，染色質(zhì)dna 在核小體單位之間的連接處斷裂,。凋亡早期可形成50~300kbp 的dna 大片段，晚期核酸內(nèi)切酶在核小體之間剪切核dna,，產(chǎn)生大量長度在180~200bp 整數(shù)倍的寡核苷酸片段,。

2、膜聯(lián)蛋白v 法

磷脂酰絲氨酸(ps)位于正常細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在細(xì)胞凋亡的早期,，ps 可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜表面,。annexin-ⅴ(膜聯(lián)蛋白-v)是一種分子量為35-36kd 的ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與ps高親和力,。將annexin-ⅴ進(jìn)行熒光素或生物素標(biāo)記,，以標(biāo)記了的annexin-ⅴ作為探針，利用流式細(xì)胞儀,、熒光顯微鏡以及共聚焦激光掃描顯微鏡檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生,。

3、細(xì)胞凋亡的酶caspase檢測

檢測caspase活力可用免疫雜交技術(shù)分析酶原的加工和底物水解的產(chǎn)物,，或用人工底物檢測酶活力,，也可對活化的caspase做親和標(biāo)記。例如分析底物的水解產(chǎn)物,，parp(多聚adp-核糖聚合酶)第一個被認(rèn)識的caspase-3底物,，它的相對分子質(zhì)量為116000，水解后形成相對分子質(zhì)量為85000 及相對分子質(zhì)量為25000 的兩個片段,，用抗相對分子質(zhì)量為85000 片段的抗體檢測細(xì)胞是否發(fā)生凋亡,。

4、線粒體膜勢能變化的檢測

線粒體跨膜電位的存在,，使一些親脂性陽離子熒光染料可結(jié)合到線粒體基質(zhì),，其熒光的增強(qiáng)或減弱反映了線粒體內(nèi)膜電負(fù)性的增高或降低流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的熒光強(qiáng)度或熒光顯微鏡觀察，拍照正常細(xì)胞中, rh123 能夠依賴線粒體跨膜電位進(jìn)入線粒體基質(zhì),，熒光強(qiáng)度減弱或消失,。而凋亡時，線粒體膜完整性破壞,，線粒體膜通透性轉(zhuǎn)運孔開放,，引起線粒體跨膜電位的崩潰, rh123 重新釋放出線粒體, 從而發(fā)出強(qiáng)黃綠色熒光。

生物細(xì)胞凋亡總結(jié)分析 生物細(xì)胞衰老與凋亡篇三

1,、磷脂酰絲氨酸外翻分析（annexin v法）

磷脂酰絲氨酸（phosphatidylserine, ps）正常位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè),，但在細(xì)胞凋亡的早期，ps可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面,，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中(圖3),。annexin-v是一種分子量為35~36kd的ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與ps高親和力特異性結(jié)合,。將annexin-v進(jìn)行熒光素（fitc,、pe）或biotin標(biāo)記，以標(biāo)記了的annexin-v作為熒光探針,，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生,。

ps轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所獨特的,，也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的,，而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就破壞了。

碘化丙啶(propidine iodide, pi)是一種核酸染料,，它不能透過完整的細(xì)胞膜,，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，pi能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核紅染,。因此將annexin-v與pi匹配使用,，就可以將凋亡早晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來。

在雙變量流式細(xì)胞儀的散點圖上,，左下象限顯示活細(xì)胞,，為（fitc-/pi-）；右上象限是非活細(xì)胞,，即壞死細(xì)胞,，為（fitc+/pi+）；而右下象限為早期凋亡細(xì)胞,，顯現(xiàn)（fitc+/pi-）,。右上象限為獨立的核（fitc-/pi+）。

annexin-v可以再鈣離子存在的情況下,，和細(xì)胞表面外翻的磷脂酰絲氨酸結(jié)合,，而磷脂酰絲氨酸的外翻是細(xì)胞凋亡的早期事件。

pi是一種dna染料,，當(dāng)細(xì)胞凋亡的晚期,，細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增加，pi從而進(jìn)入細(xì)胞核與dna結(jié)合,。

所以

annexin-v陰性-pi陰性 代表正常細(xì)胞

annexin-v陽性-pi陰性 代表凋亡早期的細(xì)胞

annexin-v陽性-pi陽性 代表凋亡晚期的細(xì)胞或壞死的細(xì)胞

annexin-v陰性-pi陽性 一般不存在這一群細(xì)胞,，如果出現(xiàn)這一團(tuán)細(xì)胞可能是pi標(biāo)記時間過長，或者操作過于劇烈而傷害到原本正常的細(xì)胞,。（還有一種說法是凋亡最后階段的細(xì)胞,，細(xì)胞已經(jīng)沒有細(xì)胞膜了說以不結(jié)合annexin-v而只結(jié)合pi）

2.線粒體膜電位變化的檢測

實驗原理

jc-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential)△ψm的理想熒光探針?？梢詸z測細(xì)胞,、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時,，jc-1 聚集在線粒體的基質(zhì)(matrix)中,，形成聚合物(j-aggregates)，可以產(chǎn)生紅色熒光（fl-2 通道）,；在線粒體膜電位較低時,，jc-1 不能聚集在線粒體的基質(zhì)中，此時jc-1 為單體(monomer)，可以產(chǎn)生綠色熒光（fl-1 通道）,。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉(zhuǎn)變來檢測線粒體膜電位的變化,。常用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體去極化的比例。線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個標(biāo)志性事件,。通過 jc-1 從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變可以很容易地檢測到細(xì)胞膜電位的下降,，同時也可以用jc-1 從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變作為細(xì)胞凋亡早期的一個檢測指標(biāo)。

jc-1 單體的最大激發(fā)波長為 514nm,，最大發(fā)射波長為 527nm,；jc-1 聚合物(j-aggregates)的最大激發(fā)波長為 585nm，最大發(fā)射波長為 590nm,。

a-c 為對照,，細(xì)胞亞群(r1)在 fl-2和fl-1 通道同時顯示 jc-1 的熒光信號。d-f 顯示 jc-1在fl-2通道熒光信號降低的細(xì)胞亞群(r2)顯著增加,，證明線粒體膜電位△ψm 下降,，細(xì)胞發(fā)生凋亡。凋亡與線粒體膜電位的去極化相關(guān),。細(xì)胞凋亡時線粒體膜電位發(fā)生去極化,，jc-1進(jìn)入線粒體以單體形式存在，僅在fl-1通道有熒光,。

檢測原理

正常細(xì)胞：jc-1聚集在線粒體內(nèi),，形成多聚體，呈鮮紅色熒光,，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有綠色,；即紅光++，綠光++,。

凋亡細(xì)胞：由于線粒體跨膜電位的破壞,，不能聚集到線粒體內(nèi)，紅色熒光減弱,，單體的形式存在于胞質(zhì)內(nèi)發(fā)綠色熒光,。即紅光+，綠光++

3,、caspase-3活性的檢測

caspase家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程中起著非常重要的作用,，其中caspase-3為關(guān)鍵的執(zhí)行分子，它在凋亡信號傳導(dǎo)的許多途徑中發(fā)揮功能,。caspase-3正常以酶原（32kd）的形式存在于胞漿中,，在凋亡的早期階段，它被激活,，活化的caspase-3由兩個大亞基（17kd）和兩個小亞基（12kd）組成,，裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物,，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。但在細(xì)胞凋亡的晚期和死亡細(xì)胞,，caspase-3的活性明顯下降,。

(1)western blot 分析procaspase-3的活化，以及活化的caspase-3及對底物多聚adp-核糖聚合酶[poly（adp-ribose）polymerase,，parp]等的裂解,。

(2)熒光分光光度計分析

檢測原理：活化的caspsae與其特異性底物devd-pna結(jié)合切割，釋放出游離pna,，通過測定其吸光度，根據(jù)其發(fā)光強(qiáng)度的高低代表其活化程度,。

(3)流式細(xì)胞術(shù)分析

pharmingen 多克隆或單克隆 caspase-3 抗體可以識別 caspase-3 活化形式,，它特異性識別由無活性的 pro-caspase-3 活化水解后的暴露的斷裂端, 熒光標(biāo)記多克隆兔抗 active-caspase-3 抗體為流式細(xì)胞術(shù)分析凋亡細(xì)胞的 caspase-3 而設(shè)計。1,、2,、3是早期凋亡現(xiàn)象；

4,、5是晚期凋亡現(xiàn)象,。

4、tunel法(末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dutp缺口末端標(biāo)記)

細(xì)胞凋亡中, 染色體dna雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量粘性3'-oh末端,，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（tdt）的作用下將脫氧核糖核苷酸和熒光素,、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到dna的3'-末端,，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測,，這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, tunel）。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有dna的斷裂,，因而沒有3'-oh形成,，很少能夠被染色。tunel實際上是分子生物學(xué)與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的研究方法,，對完整的單個凋亡細(xì)胞核或凋亡小體進(jìn)行原位染色,，能準(zhǔn)確地反應(yīng)細(xì)胞凋亡典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征，可用于石蠟包埋組織切片,、冰凍組織切片,、培養(yǎng)的細(xì)胞和從組織中分離的細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)測定，并可檢測出極少量的凋亡細(xì)胞,，因而在細(xì)胞凋亡的研究中被廣泛采用,。

5、dna ladder 細(xì)胞凋亡晚期,，核酸內(nèi)切酶在核小體之間剪切核dna,，產(chǎn)生大量長度在180-200 bp 的dna片段,。細(xì)胞經(jīng)處理后，采用常規(guī)方法分離提純dna,，進(jìn)行瓊脂糖凝膠和溴化乙啶染色,，在凋亡細(xì)胞群中可觀察到典型的dna ladder。在瓊脂糖凝膠電泳上表現(xiàn)為梯形電泳圖譜(dna ladder),。壞死細(xì)胞---連續(xù)性條帶,。

一、形態(tài)學(xué)觀察方法

1,、he染色,、光鏡觀察：凋亡細(xì)胞呈圓形，胞核深染,，胞質(zhì)濃縮,，染色質(zhì)成團(tuán)塊狀，細(xì)胞表面有“出芽”現(xiàn)象,?！咎K木精 — 伊紅染色法，(hematoxylin-eosin staining),，簡稱he染色法,。蘇木精染液為堿性，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色 ,；伊紅為酸性染料,，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色?！?/p>

2,、丫啶橙（ao）染色，熒光顯微鏡觀察：活細(xì)胞核呈黃綠色熒光,，胞質(zhì)呈紅色熒光,。凋亡細(xì)胞核染色質(zhì)呈黃綠色濃聚在核膜內(nèi)側(cè)，可見細(xì)胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體,。

3,、臺盼藍(lán)染色：如果細(xì)胞膜不完整、破裂,，臺盼藍(lán)染料進(jìn)入細(xì)胞,，細(xì)胞變藍(lán)，即為壞死,。如果細(xì)胞膜完整,，細(xì)胞不為臺盼藍(lán)染色，則為正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞,。此方法對反映細(xì)胞膜的完整性,，區(qū)別壞死細(xì)胞有一定的幫助,。

4、透射電鏡觀察：可見凋亡細(xì)胞表面微絨毛消失,，核染色質(zhì)固縮,、邊集，常呈新月形,，核膜皺褶,，胞質(zhì)緊實，細(xì)胞器集中,，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小體和凋亡小體被臨近巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象,。

一、細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測

1,、光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡

（1）未染色細(xì)胞：凋亡細(xì)胞的體積變小,、變形，細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象,，細(xì)胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮,、變圓,、脫落。

（2）染色細(xì)胞：常用姬姆薩染色,、瑞氏染色等,。凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化,，核膜裂解,、染色質(zhì)分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。

2,、熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡

一般以細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變?yōu)橹笜?biāo)來評判細(xì)胞凋亡的進(jìn)展情況,。常用的dna特異性染料有：ho 33342(hoechst 33342)，ho 33258(hoechst 33258), dapi,。三種染料與 dna的結(jié)合是非嵌入式的,，主要結(jié)合在dna的a-t堿基區(qū)。紫外光激發(fā)時發(fā)射明亮的藍(lán)色熒光,。

hoechst是與dna特異結(jié)合的活性染料,，儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度，使用時用pbs稀釋成終濃度為2~5mg/ml,。

dapi為半通透性,，用于常規(guī)固定細(xì)胞的染色。儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,，使用終濃度一般為0.5 ~1mg/ml,。

結(jié)果評判：細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為三期：ⅰ期的細(xì)胞核呈波紋狀（rippled）或呈折縫樣（creased）,，部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài)；ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚,、邊緣化,；ⅱb期的細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體(圖1),。

3,、透射電子顯微鏡觀察

結(jié)果評判：凋亡細(xì)胞體積變小，細(xì)胞質(zhì)濃縮,。凋亡ⅰ期（pro-apoptosis nuclei）的細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤繞,，出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象（cavitations）的空泡結(jié)構(gòu)(圖2)；ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚,、邊緣化,；細(xì)胞凋亡的晚期，細(xì)胞核裂解為碎塊,，產(chǎn)生凋亡小體,。圖2

七、凋亡相關(guān)蛋白tfar19蛋白的表達(dá)和細(xì)胞定位分析

tfar19（pdcd5）是由本研究室在國際上首先報導(dǎo)的一個擁有自己知識產(chǎn)權(quán)的人類新基因,，前期的功能研究表明,，它是促進(jìn)細(xì)胞凋亡的增強(qiáng)劑。利用熒光素（fitc）標(biāo)記的tfar19單克隆抗體為探針,，對細(xì)胞凋亡過程中tfar19蛋白的表達(dá)水平及定位研究發(fā)現(xiàn),，凋亡早期tfar19表達(dá)水平增高并出現(xiàn)快速核轉(zhuǎn)位現(xiàn)象，伴隨著細(xì)胞核形態(tài)學(xué)的變化,，持續(xù)較長時間,，在凋亡小體中仍然可見。同時我們發(fā)現(xiàn),，凋亡早期tfar19蛋白的核轉(zhuǎn)位早于磷脂酰絲氨酸（ps）外翻和細(xì)胞核dna的片段化,，提示tfar19蛋白的核轉(zhuǎn)位是細(xì)胞凋亡更早期發(fā)生的事件之一。進(jìn)一步的研究證明,，凋亡早期tfar19的核轉(zhuǎn)位具有普遍意義,，不同細(xì)胞凋亡早期均出現(xiàn)tfar19高表達(dá)和核轉(zhuǎn)位。這為研究細(xì)胞凋亡早期所發(fā)生的事件,，提供了一種新的技術(shù)和指標(biāo),。

生物細(xì)胞凋亡總結(jié)分析 生物細(xì)胞衰老與凋亡篇四

講義 孟凡雷

要點提煉

死亡是生命的普遍現(xiàn)象，但細(xì)胞死亡并非與機(jī)體死亡同步,。細(xì)胞凋亡是由基因來控制的正常的組織中,，經(jīng)常發(fā)生“正常”的細(xì)胞死亡，它是維持組織一個自然過程,。機(jī)能和形態(tài)所必需的,。這種正常死亡是普遍存在于生物體中的細(xì)胞凋亡（cell apoptosis）現(xiàn)象。

細(xì)胞凋亡是指在生物個體生長發(fā)育過程中,，由基因控制的,，按照一定程序發(fā)生的細(xì)胞死亡，因而細(xì)胞凋亡又稱為程序性細(xì)胞死亡（pcd）,。

1.細(xì)胞凋亡的過程和機(jī)制 細(xì)胞凋亡發(fā)生時,，器官和組細(xì)胞凋亡是借用古希臘語，表示細(xì)胞像秋天的樹葉一樣凋織并沒有發(fā)生壞死現(xiàn)象,，即不發(fā)落的死亡方式,。1972年kerr最先提出這一概念，他發(fā)現(xiàn)結(jié)扎大生炎癥,。而當(dāng)細(xì)胞受到急性強(qiáng)力鼠肝的左,、中葉門靜脈后，其周圍細(xì)胞發(fā)生缺血性壞死,，但由傷害時立即出現(xiàn)的早期反應(yīng),。包肝動脈供應(yīng)區(qū)的實質(zhì)細(xì)胞仍存活，只是范圍逐漸縮小,，其間一括胞膜直接破壞,，然后發(fā)生炎癥些細(xì)胞不斷轉(zhuǎn)變成細(xì)胞質(zhì)小塊，不伴有炎癥,，后在正常鼠肝中（如下圖）,。也偶然見到這一現(xiàn)象,。與細(xì)胞壞死是有區(qū)別的,。細(xì)胞凋亡可以分為以下三個階段：

①凋亡的起始：細(xì)胞皺縮，細(xì)胞連接消失,，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膨脹,，染色質(zhì)固縮、分塊,，位于核膜上,。

②凋亡小體的形成：核膜破裂，染色體斷裂為大小不等的片斷,，與一些細(xì)胞器聚集后被內(nèi)折的細(xì)胞膜包圍,，在細(xì)胞表面形成許多泡狀和芽狀的突起，這些突起叫做凋亡小體（如下圖）,。

細(xì)胞凋亡的過程是細(xì)胞機(jī)能的退化,，進(jìn)而細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的破裂，然后被吞噬細(xì)胞吞噬消化,。

③細(xì)胞的解體：凋亡小體逐漸與細(xì)胞分離,，脫落至細(xì)胞間質(zhì),，最終被周圍的細(xì)胞吞噬并消化。

探究活動

細(xì)胞凋亡的機(jī)制

【實驗1】 蛙胚發(fā)育22天時,，前腦兩側(cè)向外凸出,，形成視泡。視泡與外面的外胚層上皮接觸,，誘導(dǎo)后者形成晶狀體,，隨后在視杯和晶狀體共同誘導(dǎo)下外面的表皮形成角膜。如果把視泡切下,，移植到頭部任何部位,，亦可誘導(dǎo)與其接觸的上方外胚層發(fā)育為晶狀體。在胚胎細(xì)胞分化中,，誘導(dǎo)作用普遍存在,，它對個體發(fā)生和建成具有重要意義。

【實驗2】 激素對細(xì)胞分化的影響可看作是遠(yuǎn)距離細(xì)胞間的相互作用,，這種作用在動物個體發(fā)生中比較普遍存在,。例如

要點提煉

動物在一定的胚胎發(fā)育時期，一部分細(xì)胞影響相鄰的細(xì)胞使其向一定方向分化的作用稱為胚胎誘導(dǎo),。眼的發(fā)生是胚胎誘導(dǎo)的典型例證,。

細(xì)胞凋亡的發(fā)生是受甲狀腺激素的調(diào)節(jié)的，甲狀腺激素對發(fā)無尾兩棲類的幼體發(fā)育要經(jīng)過一變態(tài)階段,，在此階段中發(fā)生的變化有蝌蚪的尾鰭和尾部被吸收,，前后肢形成等。這些變化與甲狀腺分泌的甲狀腺素有關(guān)系,。幼體發(fā)育到一定時期,，甲狀腺激素分泌量增加，便引起變態(tài),。人類胎兒時期,，指(趾)間組織和尾部組織也發(fā)生與蝌蚪尾部退化相類似的變化。

2.細(xì)胞凋亡的意義

葉落歸根是因為樹葉的自然生命走到了盡頭,，而人和生物的最基本組成元素——細(xì)胞到了一定時期也會像樹葉那樣自然死亡,，但是這種死亡是對于個體的正常發(fā)育、代謝等有著重要的意義,。

（1）有利于清除多余,、無用的細(xì)胞。這種細(xì)胞死亡對于胚胎發(fā)育是必需的,，比如,，蝌蚪變形成為青蛙就是如此。在人類胚胎，手指與腳趾的形成中也需要一部分細(xì)胞程序性死亡,，如此才可能生成指,、趾。同樣,，在大腦發(fā)育的最初階段程序性細(xì)胞死亡也決定著大量神經(jīng)細(xì)胞的產(chǎn)生與消亡,。

（2）有利于清除完成正常使命的衰老細(xì)胞。無論在發(fā)育期還是在成人體內(nèi),，既有大量的新細(xì)胞產(chǎn)生,，也有大量的舊細(xì)胞死亡，這是生物體的一種自然現(xiàn)象,。為了維持機(jī)體組織中適宜的細(xì)胞數(shù)量,，在細(xì)胞分裂和細(xì)胞死亡之間需要一種精確的動態(tài)平衡。由于這種生成與死亡的有序流程,，在胚胎和成人期便維持著人體組織的適宜細(xì)胞數(shù)量,。而這種精密地控制細(xì)胞的消亡過程就稱為程序性細(xì)胞死亡。

（3）有利于清除體內(nèi)的有害細(xì)胞,。關(guān)于程序性細(xì)胞死亡的知識可以幫助我們更深刻地理解健康與疾病,、生命與死亡，以及它們之間的相互關(guān)系,。比如,，在健康的機(jī)體中，細(xì)胞的生與死總是處在一種良性的動態(tài)平衡中,，如果這種平衡被破壞,，人就會患病。比如,，癌癥就是該死亡的細(xì)胞沒有死亡而造成的,。而在艾滋病病毒的攻擊下，不該死亡的淋巴細(xì)胞大量死亡,，人的免疫力遭破壞,，艾滋病便發(fā)作,。

3.細(xì)胞凋亡與人類健康

（1）細(xì)胞凋亡過度造成的疾?。杭?xì)胞凋亡也幫助我們理解一些病毒和細(xì)菌侵襲人體細(xì)胞的機(jī)理。除了aids,，另外一些疾病,，如帕金森氏綜合癥、再生障礙性貧血（是骨髓造血功能衰竭的一組綜合癥）等都是由于很多正常細(xì)胞被不正確地啟動了程序性死亡過程而造成細(xì)胞過量死亡,。

（2）細(xì)胞凋亡不足造成的疾病,，如上面提到的腫瘤的發(fā)生等。有了對程序性細(xì)胞死亡的認(rèn)識，還可把這種認(rèn)識應(yīng)用和深化到一些嚴(yán)重威脅人類疾病,，如癌癥的防治上,。比如，目前臨床許多治療方法是建立在刺激細(xì)胞“自殺程序”的基礎(chǔ)上的,。這是一種非常有意味和挑戰(zhàn)性的工作,，可以預(yù)言，通過進(jìn)一步研究能夠找到更精確的方式來誘發(fā)癌細(xì)胞的細(xì)胞死亡,，從而戰(zhàn)勝癌癥,。

育起促進(jìn)作用。

思維拓展

大腦的發(fā)育初期,，具有大量的神經(jīng)細(xì)胞,，發(fā)育的過程就是大量的無用神經(jīng)元的死亡。要點提煉

正常的生命需要細(xì)胞分裂以產(chǎn)生新細(xì)胞,，并且也要有細(xì)胞的死亡,，由此人體和生物的器官才得以維持平衡。

沒有了正常的細(xì)胞凋亡,，人與動物體將會得病,。癌癥是該死亡的細(xì)胞沒有死亡而造成的。

全析提示

帕金森氏綜合癥是以震顫,、肌強(qiáng)直,、體位反射消失為特征的綜合癥，是60歲以上老年人多發(fā)病之一,，往往與老年癡呆伴發(fā),。

思維拓展

腫瘤分子生物學(xué)的焦點可能仍然是細(xì)胞增殖的控制，因為這是許多癌基因發(fā)揮作用的地方,。然而現(xiàn)在有有力證據(jù)表明必須考慮問題的另一方面,，即細(xì)胞的死亡率。

生物細(xì)胞凋亡總結(jié)分析 生物細(xì)胞衰老與凋亡篇五

課程報告

都在說二十一世紀(jì)是生命科學(xué)的世紀(jì),，很榮幸能夠進(jìn)入生物科學(xué)這個行業(yè),。

關(guān)于對自己所學(xué)專業(yè)，可能最初是興趣讓我來到這個專業(yè),，不是太清楚為什么會對這個專業(yè)有這么大的熱情,，但真的很喜歡它。生物技術(shù),，最官方的定義是指人們以現(xiàn)代生命科學(xué)為基礎(chǔ),，結(jié)合其他基礎(chǔ)科學(xué)的科學(xué)原理，采用先進(jìn)的科學(xué)技術(shù)手段,，按照預(yù)先的設(shè)計改造生物體或加工生物原料,，為人類生產(chǎn)出所需產(chǎn)品或達(dá)到某種目的,。生物技術(shù)是人們利用微生物、動植物體對物質(zhì)原料進(jìn)行加工,，以提供產(chǎn)品來為社會服務(wù)的技術(shù),。它主要包括發(fā)酵技術(shù)和現(xiàn)代生物技術(shù)。現(xiàn)代生物技術(shù)綜合基因工程,、分子生物學(xué),、生物化學(xué)、遺傳學(xué),、細(xì)胞生物學(xué),、胚胎學(xué)、免疫學(xué),、有機(jī)化學(xué),、無機(jī)化學(xué)、物理化學(xué),、物理學(xué),、信息學(xué)及計算機(jī)科學(xué)等多學(xué)科技術(shù)，可用于研究生命活動的規(guī)律和提供產(chǎn)品為社會服務(wù)等,。

再我自己看來生物技術(shù)其實是一個既可以看做一個基礎(chǔ)學(xué)科也可以看做是一個很新興的,，綜合性的學(xué)科。其實生物技術(shù)這是一個很綜合性的學(xué)科,，現(xiàn)在和很多領(lǐng)域接軌,，對我們而言這是機(jī)遇和挑戰(zhàn)。

對我自己而言,，我想在生物技術(shù)這方面有所建樹,，最主要的還是在科研方面能攻克一些難題，雖然可能現(xiàn)在想法不是太成熟但是我相信經(jīng)過幾年的磨練與努力我能夠攻破這些難題,。希望能夠在大一下就能夠進(jìn)入實驗室,，學(xué)一些基礎(chǔ)的實驗技能為以后自己做項目打下基礎(chǔ)。

然后關(guān)于自己的專業(yè),，現(xiàn)在我們所學(xué)的知識其實普遍落后,，教科書的編排更新不及時，可能我們學(xué)到的東西可能學(xué)校外面已經(jīng)開始產(chǎn)業(yè)化了,，測序技術(shù)已經(jīng)開始第四代了,，而我們可能畢業(yè)前一年才開始學(xué)習(xí)切片制作，學(xué)習(xí)的東西很古老,，再就是我們這個專業(yè),，并沒有像其他幾大理科領(lǐng)域一樣有清晰的邏輯和量化,，這導(dǎo)致了很多小領(lǐng)域只有開頭和結(jié)果而沒有一個可復(fù)制的過程,，而沒有可復(fù)制的過程就代表著無法帶領(lǐng)這個行業(yè)產(chǎn)業(yè)化,，因此，這個行業(yè)在沒有開源的情況下就無法支撐這個領(lǐng)域下的大多數(shù)學(xué)生的溫飽,，就只能節(jié)流,，這樣就導(dǎo)致了本專業(yè)的人才無法繼續(xù)從事與本專業(yè)有關(guān)行業(yè)，轉(zhuǎn)而從事其他行業(yè),，從而導(dǎo)致人才流失,，最終專業(yè)發(fā)展緩慢。而談到生物技術(shù)不得不說到它和其他行業(yè)接軌這一問題,，的確,，和其他領(lǐng)域接軌形成交叉學(xué)科是一個理想的出路，如合成生物學(xué),，生物信息學(xué),，的確給生物注入了一股生機(jī)。但是我們都知道越巨大的事物邁步子很大也很緩慢,，何況在人才流失的情況下,。

說到這里，可能真的學(xué)習(xí)這個專業(yè)我們更多的是在學(xué)習(xí)了基礎(chǔ)課程后,，自己學(xué)習(xí)最新更新的知識,，在老師的指導(dǎo)下自己收集資料自己進(jìn)行實驗，再完成項目,。

很多人對生物技術(shù)這個專業(yè)有很多的誤解,，我們在完成自己研究項目的同時也有義務(wù)科普大眾。畢竟這也是吸引人才的重要途徑,，同時也是解決本專業(yè)人才流失的好方法,。

我自己有一個不成熟的想法，很久之前曾了解到俄羅斯的“永生計劃”它的設(shè)計活體意識轉(zhuǎn)移到機(jī)器人身上,，對此幾乎大多數(shù)人是不看好,，不支持的。而對于這個“永生計劃” 我有一個想法,，癌細(xì)胞是無限增殖,，如果我們能夠完全弄清楚癌細(xì)胞的增殖過程及機(jī)理，并能夠運用到人體衰老細(xì)胞中,，對衰老細(xì)胞進(jìn)行基因修飾添加經(jīng)過改良的癌細(xì)胞中能夠無限增殖的基因,，或許“永生”并非不可能。同樣的癌細(xì)胞的無限增殖基因或許也能在器官移植這一領(lǐng)域有所貢獻(xiàn),，也是利用無限增殖,，讓器官細(xì)胞增殖，成長成完整的細(xì)胞,?；蛟S研究出癌細(xì)胞無限增殖的機(jī)理并提取其這個基因?qū)θ祟悤泻艽筘暙I(xiàn),。

至于疑惑這個方面就是在教材更新?lián)Q代不及時的情況下，我們是否只能通過課外閱讀這些方式來擴(kuò)展自己的知識面,，還有就是技術(shù)的更新我們是否能夠跟的上,，倘若有同學(xué)本科畢業(yè)便想進(jìn)入行業(yè)工作，最新的技術(shù)他們又要從何學(xué)習(xí),。最后關(guān)于實驗室,，畢竟如果想要真的從事生物研究該如何合理利用現(xiàn)有資源來完成自己的項目。

最后我個人的話最想獲得的是關(guān)于癌細(xì)胞無限增殖機(jī)理方面的指導(dǎo),，和我不成熟構(gòu)想的可實施率,。

以上是我個人對本專業(yè)的認(rèn)識及理解，以及對未來設(shè)想,。

謝謝老師閱讀,，有不正確的地方請老師批評指正。